A técnica do PCR (Polymerase Chain Reaction) tem como principal object
ivo amplificar uma determina porção de DNA, ou seja é uma técnica a partir da qual podemos clonar DNA em grandes quantidades a partir de uma pequena amostra. Uma questão que se levanta quando se pretende trabalhar com os genes dos indivíduos é a da quantidade de DNA que é necessária para este procedimento – cerca de 1 micrograma – e é através desta técnica que se conseguem obter grandes quantidades de DNA, partindo de uma pequena amostra. Foi introduzida pela primeira vez pelo químico Kary Mullis em 1983, e esta descoberta valeu-lhe o Prémio Nobel da Química. O PCR (reacções de polimerização em cadeia) é então uma técnica que permite clonar DNA de modo a obter grandes quantidades a partir de uma pequena amostra.
ivo amplificar uma determina porção de DNA, ou seja é uma técnica a partir da qual podemos clonar DNA em grandes quantidades a partir de uma pequena amostra. Uma questão que se levanta quando se pretende trabalhar com os genes dos indivíduos é a da quantidade de DNA que é necessária para este procedimento – cerca de 1 micrograma – e é através desta técnica que se conseguem obter grandes quantidades de DNA, partindo de uma pequena amostra. Foi introduzida pela primeira vez pelo químico Kary Mullis em 1983, e esta descoberta valeu-lhe o Prémio Nobel da Química. O PCR (reacções de polimerização em cadeia) é então uma técnica que permite clonar DNA de modo a obter grandes quantidades a partir de uma pequena amostra. Esta técnica da Engenharia genética tem essencialmente três fases:
- Desnaturação do DNA- há um aquecimento do DNA a 94/96ºC para separar as duas cadeias da dupla hélice;
Adição de um primer (oligonucleótido) que se vai ligar ao DNA em pontos específicos, delimitando a zona copiar;
- Adição de nucleótidos e da enzima DNA Polimerase (Taq) para que a dupla hélice seja reconstruída a partir de uma das cadeias simples;
- Repetição do procedimento de modo a produzir cópias suficientes do DNA em estudo.
Uma vez que esta técnica implíca ao longo do tempo variações de temperatura, adições de primers e DNA polimerase foi necessário criar um aparelho que conseguisse fazer tudo isto.
O PCR tem múltiplas aplicações de entre as quais o diagnóstico de doenças, medicina Forense, detecção de polimorfismos e mutações patológicas, amplificação indiscriminada de sequências de DNA e amplificação de sequências de DNA desconhecidas.
É uma das ferramentas para o futuro porque tem baixo custo, a amostra de DNA não necessita de estar altamente purificada, o PCR pode amplificar uma única molécula de DNA / RNA, o produto do PCR pode ser digerido com enzimas de restrição, sequenciado ou clonado e embora seja necessário uma grande quantidade de DNA obtém-se o resultado num curto espaço de tempo.
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